Diventare con la comune di Schizophyllum: creare una coltura sterile dai funghi trovati: 3 passaggi (con immagini)

2024 Autore: John Day | [email protected]. Ultima modifica: 2024-01-30 10:04

Questo tutorial è focalizzato sulla spiegazione di come creare una coltura sterile del fungo Schizophyllum Commune (nome comune fungo Split Gill) su una capsula di Petri usando funghi trovati. È stato scoperto che la comune di Schizophyllum ha oltre 28.000 sessi, può essere trovata in tutti i continenti tranne l'Antartide e ha la capacità (come altri "funghi del marciume bianco e bruno") di degradare l'inquinamento endocrino (plastica, ormoni che imitano i prodotti petrolchimici industriali come il fertilizzante Atrazina, il plastificante Bisfenolo-A o l'ormone sintetico Dietilstilbestrolo).

Esaminerò le tecniche di identificazione dei funghi selvatici, come preparare una capsula di agar Petri nutriente e come utilizzare i funghi trovati per coltivare una coltura sterile isolata nella tua capsula di Petri. Altre istruzioni in questa serie riguardano tecniche come l'identificazione genetica dei funghi, semplici saggi enzimatici per testare la capacità del fungo di scomporre la plastica e l'inquinamento che imita gli ormoni e come fare il formaggio con S. Commune.

Questo progetto è nato dal lavoro collaborativo di Mary Maggic, Paula Pin e me durante una residenza all'HANGAR di Barcellona, Spagna, autunno settembre 2018. Per maggiori informazioni sul progetto continua a leggere ~~ o salta tutti i Bla Bla e vai direttamente a Step 1 per il tutorial:)

Le immagini provengono dalla Fanzine di Schizophyllum Commune ~ i file possono essere scaricati gratuitamente qui

Durante la residenza i nostri tre obiettivi principali erano:

1 ~ Ricerca e assimila la letteratura scientifica su Schizophyllum Commune e le sue varie interazioni con ormoni e inquinanti petrolchimici che alterano il sistema endocrino. S. Commune è uno dei tanti funghi "marciume bianco e marrone" con la capacità di abbattere l'inquinamento ormonale ed endocrino. Questi funghi si nutrono degli alberi espellendo enzimi "lignocellulosici" dai loro corpi in rete o "miceli" e gli enzimi sono in grado di abbattere la cellulosa e la lignina di cui sono fatti gli alberi. A causa delle somiglianze strutturali tra cellulosa, lignina e EDS'/ormoni come atrazina, BPA, estradiolo, dietilstilbestrolo e nonilfenoli, gli enzimi "lignocellulosici" secreti dai funghi possono anche abbattere un'ampia varietà di sostanze tossiche. Oltre a questo, S. Commune produce polisaccaridi immunostimolanti che sono utili come prevenzione e cura del cancro (approvato in Giappone per il trattamento dei tumori della cervice uterina), possono migliorare le proprietà fitoestrogeniche di alcune piante attraverso la fermentazione, possono essere usati al posto del caglio e del lattobacillo in processi di caseificazione e producono enzimi che dissolvono il coagulo di trombina (utili nel trattamento della trombosi). Stranamente, questi stessi "beta-glucani" che possono essere estratti con acqua bollente come trattamenti antitumorali e immunostimolanti, sono utilizzati anche dall'industria petrolifera per aumentare le rese di petrolio, legando S. Comune in un bizzarro ciclo di feedback alla produzione dell'interferente endocrino petrolchimici è in grado di degradare e bonificare.

2 ~ Sviluppare protocolli DIY e DIWO (fai con altri) che semplifichino queste ricette per lavorare con EDC e funghi per tradurre la conoscenza scientifica codificata in un linguaggio più accessibile. Usa queste ricette per l'educazione, per le domande, per la resistenza alle colonizzazioni molecolari e per creare nuove narrazioni sui divenire multispecie e sulla nostra mutagenesi collettiva.

3 ~ Sfida il discorso dominante ciseteronormativo e queerfobico che circonda le sostanze chimiche interferenti endocrine (EDC). Per citare la borsa di studio di Malin Ah-King ed Eva Hayward sui problemi, "Molti organi di stampa riportano questi spaventosi racconti endocrini dai nostri cortili. Nel tentativo di mettere in primo piano questi problemi, come descriveremo in seguito, i media hanno illuminato una metamorfosi di Frankenstein. che minaccia il sesso e la sessualità. Piuttosto che affrontare i molti altri rischi per la salute associati all'esposizione a sostanze tossiche, le questioni più sensazionali e polemiche sono oggetto di dibattito e risposta critica. Solleva interrogativi: perché il sesso è più centrale del cancro, delle malattie autoimmuni, e persino la morte? Quali nervi culturali (molti dei quali sono globalizzati) si innescano? E, per quelli di noi con preoccupazioni femministe, come riorientare il dibattito lontano dall'essenzialismo, dal sessismo e dall'eteronormatività?" (Sessi tossici).

Schizophyllum Commune è un "fungo del marciume bianco" unico in quanto è stato scoperto che ha oltre 28.000 sessi genetici. Questo adattamento, molti teorizzano, ha permesso l'incredibile diversità genetica di questa specie che esiste in tutti i continenti del mondo tranne l'Antartide. Volevamo celebrare la bella molteplicità sessuale di questo organismo come un esempio della stranezza della biologia. Il discorso dominante che circonda l'EDC nei media, e anche dagli attivisti ambientali, si concentra pesantemente su narrazioni non scientifiche, secondo cui queste molecole causano determinate sessualità o generi che la nostra società patologizza, etichetta non normativa e spesso cerca di eliminare o evitare. Non solo il panico sessuale e il fobico queer della protesta pubblica contro gli EDC scientificamente irrealistici (gli ormoni e gli interferenti endocrini non rendono le persone queer o trans) ma ignora tutti gli effetti devastanti e reali che possiamo collegare agli EDC: obesità, disturbi della tiroide, alcuni tipi di cancro, tra gli altri rischi per la salute.

Passaggio 1: trova la comunità Schizophyllum che vive nella tua comunità

Le colture sterili di laboratorio di Schizophyllum Commune possono essere acquistate per circa $ 350 da una banca di colture microbiologiche come ATCC… ed è per questo che abbiamo optato per la coltura da funghi selvatici gratuitamente:)

Ho avuto vita facile perché stavo leggendo su Schizophyllum Commune e ho notato che un giorno cresceva su un albero di fronte al mio appartamento. Se non sei così fortunato da imbatterti accidentalmente in S. Comune nel tuo quartiere, ti consigliamo di andare in un'area boschiva per cercare funghi "a staffa" che crescono su alberi di legno duro malaticcio (alberi che sembrano non fare troppo bene) o alberi caduti. S. Commune è uno dei funghi esistenti più comuni in tutto il mondo e può essere trovato praticamente ovunque ci sia legno duro su cui crescere.

Mushroomobserver.org fornisce un'ottima descrizione dettagliata di dove e quando è probabile che tu trovi S. Commune, nonché come identificarlo e come evitare "somiglianze" che potrebbero portare a errori di identificazione:

IDENTIFICAZIONE: Schizophyllum commune è facilmente identificabile per le sue branchie divise, i capelli densi e il cappello a forma di ventaglio. Il cappello è largo 1-4,5 cm e solitamente a forma di conchiglia o ventaglio con una superficie da grigia a biancastra. Le basidiospore sono 5-7,5 × 2 -3 micrometri Un fungo simile noto come Plicaturopsis crispa "Grimped Gill" non è così ampiamente distribuito.

HABITAT: La comune di Schizophyllum cresce su legno duro usando enzimi per degradare la lignina e provoca "marciume bianco". Quindi si trova nella maggior parte delle aree boscose. Si può trovare tutto l'anno grazie alla sua capacità di seccarsi, reidratarsi in condizioni migliori e quindi continuare a sporulare.

Questo fungo può essere parassita su alberi di piccolo diametro che sono sotto stress da altri fattori, come la siccità.

LOOK Alikes: La Plicaturopsis crispa o la "Grilla arricciata" è simile alla branchia divisa. Ha anche un corpo fruttifero a forma di conchiglia/ventaglio. Tuttavia il cappello è di un bruno rossastro o di un giallo bruno, e la parte inferiore è molto particolare. Ha venature simili a branchie che sono molto diverse dalle branchie divise del comune di Schizophyllum. Il Crimped Gill è meno comune ma distintivo quando viene trovato."

Passaggio 2: preparare piastre di agar nutriente su cui S. Commune possa crescere

Per isolare una coltura del S. Comune che hai scoperto avrai bisogno di alcune capsule di Petri piene di cibo per il fungo. L'agar estratto di malto è un alimento semplice da preparare per S. Commune, o "mezzi nutritivi" che possono essere realizzati con ingredienti facilmente accessibili. È anche una buona fonte di cibo da utilizzare quando si eseguono esperimenti di analisi enzimatica con S. Commune e altri funghi del marciume bianco o marrone ~~ questo processo sarà trattato in un'altra istruzione.

NOTA A SECONDA: Se hai avuto problemi a trovare S. Commune, ci sono molti altri funghi della stessa famiglia che possono essere coltivati usando gli stessi processi e sono altrettanto bravi se non migliori nel degradare gli inquinanti che alterano il sistema endocrino. La coda di tacchino (Trametes Versicolor) è stata trovata in molti studi che hanno esaminato centinaia di funghi del marciume bianco e marrone come i maggiori produttori di enzimi "lignocellulosici" che degradano l'inquinamento petrolchimico. Anche i funghi ostrica sono molto bravi in questo.

Svolgo il mio lavoro microbiologico in un laboratorio di biologia comunitario chiamato BUGSS (Baltimore Underground Science Space) dove ho accesso a vetreria, bilance digitali, cilindri graduati, un'autoclave (per la sterilizzazione a calore e pressione dei media), ecc. Laboratori come questo hanno sorti in tutto il mondo negli ultimi dieci anni, quindi potresti voler controllare questo elenco per vedere se ce n'è uno vicino a te. Se non hai un grande laboratorio comunitario come questo nella tua zona, dovrai investire in alcune attrezzature di base per questo processo come:

1 ~ Una bilancia digitale per misurare con precisione i tuoi ingredienti

2 ~ Una pentola a pressione per sterilizzare i tuoi supporti con calore e vapore

3 ~ Piastre Petri, possono essere acquistate online abbastanza a buon mercato, il vetro riutilizzabile o la plastica usa e getta funzioneranno ma riutilizzabili è sempre meglio:)

4 ~ Alcuni bicchieri per mescolare gli ingredienti, sterilizzare e conservare.

Se non vuoi investire in quell'attrezzatura, puoi trovare piastre di agar con estratto di malto pre-versato da acquistare su siti Web come Amazon ~ sarà solo più costoso a lungo termine se hai intenzione di continuare a fare il lavoro microbiologico.

Ci sono già molte ottime guide e video su YouTube su come preparare in casa le tue capsule di Petri con supporti nutritivi. Quindi, piuttosto che entrare nei dettagli su questo, mi collegherò solo a un paio e fornirò la ricetta per l'agar con estratto di malto al 2%, che è il mezzo nutritivo che utilizzerai.

Funghi freschi: guida su come preparare piatti di agar per la coltivazione di funghi in casa

Mykoweb: Iniziare con la coltivazione dei funghi

Scheda tecnica dell'agar estratto di malto

Agar con estratto di malto al 2% (MEA) ~~ Ricetta per 1 litro:

20 g di estratto di malto (fornitura comune per la produzione di birra, acquistabile online)

15g Agar (agente solidificante - questo è usato per cucinare spesso in modo che possa essere acquistato online o in alcuni negozi di alimentari)

1 litro H20 (di solito uso acqua ad osmosi inversa che può essere acquistata nella maggior parte dei negozi di alimentari in caraffe da gallone)

Questa ricetta può essere facilmente modificata se si vogliono fare quantità minori. Faccio spesso solo 250 ml alla volta, ad esempio, quindi finisco per usare solo 5 grammi di estratto di malto, 3,75 grammi di agar e 250 ml di acqua.

Passaggio 3: inoculare la tua capsula di Petri con i funghi

Il fungo che vedete è chiamato il “corpo fruttifero” è solo una piccola parte dell'organismo. La maggior parte del suo corpo è nascosta nell'albero (o nel terreno), consumando il legno. Questa parte del fungo è chiamata micelio. Per coltivare il corpo bianco filamentoso, tentacolare, rizomatico e miceliale di Schizophyllum Commune su una capsula di Petri, prendi un campione dello stelo, sterilizzalo e lo metti sui tuoi piatti MEA. Il micelio crescerà dal campione del nucleo del fungo sterilizzato e colonizzerà la capsula di Petri, assomigliando a un tappetino di cotone bianco.

Avrai bisogno:

• Le piastre di Malt Extract Agar (MEA) preparate nel passaggio precedente
• Alcool isopropilico al 70% (alcol denaturato) e un flacone spray
• Tovaglioli di carta
• Bisturi o semplicemente un rasoio in acciaio inossidabile: il taglierino funzionerà
• pinzette di metallo
• guanti
• Una fiamma: uso una lampada alcohaul per la sterilizzazione degli strumenti, NonDisjunction ha un ottimo tutorial su come realizzarne una qui.
• Superficie sterile su cui tagliare (ho appena usato una capsula di Petri sterile per questo)
• Parafilm, un film di paraffina usato per sigillare le capsule di Petri: puoi anche usare del nastro adesivo se non lo hai

TECNICA STERILE:

La cosa principale che devi tenere a mente quando cerchi di usare la tecnica sterile è che i batteri e le spore cadono continuamente nell'aria, quindi devi tenere le tue piastre di Petri coperte il più possibile. Quando sollevi i coperchi per versare il terreno, o inoculare, è sempre meglio tenere il coperchio appena sopra il piatto, permettendoti di accedere all'interno orizzontalmente, ma mantenendo il coperchio sopra il piatto per evitare che i batteri cadano dentro. sono un gigantesco conglomerato di organismi umani, batterici, fungini e altri ~~ anche se non puoi vederlo, sei circondato da una densa nuvola di microbi che si stanno diffondendo dal tuo corpo. Piuttosto che sedersi sulla superficie della tua pelle, il tuo microbioma si estende nell'aria ~~ sooooooo, non agitare mai le mani sulla capsula di Petri, o sporgersi sulla capsula aperta per guardare dentro. E indossa i guanti se li hai;)

IMPOSTA IL TUO SPAZIO DI LAVORO SEMI-STERILE

Scegli una superficie di lavoro non porosa priva di detriti e spazzatura. Spruzza l'area con la soluzione di alcol isopropilico al 70% e puliscila con un tovagliolo di carta. Posiziona la fiamma al centro della tua area di lavoro e accendila. Dovrai lavorare il più vicino possibile alla fiamma perché crea un piccolo campo sterile attorno ad essa. Posiziona le piastre MEA da un lato e il campione di funghi su una superficie di taglio sterile dall'altro lato. Normalmente uso una capsula di Petri sterile come superficie di taglio sterile e come supporto per gli attrezzi. Versa dell'alcol isopropilico in un bicchierino: lo userai per sterilizzare la lama e le pinzette durante il lavoro.

*¡~ INOCULARE ~!*

Prima di fare qualsiasi cosa, sterilizza la lama e le pinzette immergendole nell'alca isopropilica e poi tenendole per un po' sulla fiamma. Dopo la sterilizzazione, appoggiali sulla superficie di taglio sterile se li metti giù. Usando le pinzette, tieni fermo il gambo del fungo e tagliane un pezzo alla fine. Prendi questo pezzo e taglia tutti i lati in modo da ottenere un piccolo cubo di torsolo di fungo senza tutte le superfici esterne. Questo aiuta a sbarazzarsi di tutti gli altri microbi che vivono sul fungo in modo che non contaminino la tua coltura. Quindi immergi il nucleo dello stelo nell'isopropile per circa 30 secondi, estrai e lascia asciugare all'interno del campo sterile della fiamma (non usare la fiamma per asciugarlo, questo ucciderà il fungo). Sterilizza di nuovo alla fiamma le pinzette mentre aspetti che il nucleo dello stelo si asciughi. Quindi solleva semplicemente il coperchio di una delle tue piastre MEA quanto basta per far scorrere le pinzette da un lato e usa le pinzette sterilizzate per posizionare il nucleo dello stelo al centro della piastra. Sigilla la piastra con parafilm e nelle prossime settimane dovresti vedere il micelio S. Comune colonizzare la piastra.

Di solito realizzo diverse piastre quando lavoro con campioni selvatici in modo che se ottengo contaminazione, è più probabile che abbia almeno una coltura pulita.